Тиреоидная пероксидаза (ТПО) - это интегральный гликопротеин апикальной мембраны фолликулярных клеток щитовидной железы. Данный фермент катализирует иодирование остатков тирозина в тиреоглобулине, запуская каскад биосинтеза тиреоидных гормонов (Ruf and Carayon, 2006). В мембране ТПО присутствует в виде гомодимера, состоящего из субъединиц с молекулярной массой около 100 кДа (Baker et al., 1994). Аутоантитела к тиреоидной пероксидазе служат основным серологическим маркером аутоиммунных патологий щитовидной железы: их выявляют у 90% пациентов с тиреоидитом Хашимото и у 75% - с болезнью Грейвса (Mariotti et al., 1990). По этой причине тест-системы для количественного определения анти-ТПО широко востребованы в клинической лабораторной диагностике.
Долгое время основным компонентом таких коммерческих наборов служил нативный антиген - ТПО человека, выделенная непосредственно из тиреоидной ткани. Однако в начале 1990-х годов было доказано, что растворимый внеклеточный домен рекомбинантной тиреоидной пероксидазы (рТПО), полученный в бакуловирусной системе (в клетках насекомых), по своим иммунохимическим свойствам полностью эквивалентен нативному аналогу (Haubruck et al., 1993). Масштабное внедрение рТПО в производство долгое время сдерживалось лишь технологическими трудностями наработки сырья в промышленных объемах (bulk amounts).
Рекомбинантная ТПО человека от компании «Хайтест» по иммунохимической активности идентична нативному антигену из операционного или секционного материала. Белок оптимизирован для использования в качестве подложки (твердой фазы) в диагностических тест-системах, предназначенных для скрининга и верификации аутоиммунных заболеваний щитовидной железы.
Продукт представляет собой растворимый внеклеточный домен ТПО человека (область 19–846 а.к.о.), экспрессированный в клетках насекомых. Расчетная молекулярная масса белка составляет 91 981 Да. Данная рТПО является бестаговой (не содержит аффинных последовательностей). Очистка до гомогенного состояния достигается сочетанием специфической аффинной хроматографии на моноклональных антителах и ионообменной хроматографии (Рис. 1). При ДСН-электрофорезе в полиакриламидном геле (SDS-PAGE) белок разделяется на две видимые полосы в диапазоне 100–110 кДа. Обе фракции специфически распознаются моноклональными антителами в вестерн-блоттинге, что подтверждает их принадлежность к ТПО. Наблюдаемая электрофоретическая гетерогенность обусловлена дифференциальным (неоднородным) гликозилированием рекомбинантного белка. Подлинность антигена дополнительно верифицирована методом масс-спектрометрии MALDI.
Вернуться к списку
